Učinkovit in poceni postopek za bistrenje in ultrafiltracijo kvasovk, ki izražajo rekombinantne proteine
Izražanje eksogenih genov v kvasovkah ne more samo proizvesti rekombinantnih proteinov in peptidov, protiteles in cepiv, citokinov, rastnih faktorjev, hormonov in drugih bioaktivnih snovi, ampak se lahko uporablja tudi za proizvodnjo industrijskih encimov, funkcionalnih živil in bioloških materialov, kar ima široke možnosti uporabe .
Ekspresijski sistem kvasovk vključuje dva pogosto uporabljena ekspresijska sistema, to sta ekspresijski sistem saccharomyces cerevisiae in metanotrofni ekspresijski sistem kvasovk. Sistem za izražanje metanolnih kvasovk je trenutno najpogosteje uporabljen sistem za izražanje kvasovk, najpogosteje uporabljen pa je Pichia, ki lahko uporablja metanol kot ogljik in energijo. Poleg tega so tu še Hansenov kvas, Sphaeroides in tako naprej.
Ne glede na vrsto ekspresijskega sistema kvasovk, so njegovi nadaljnji postopki ločevanja in čiščenja podobni, specifični tok postopka pa za primer vzame ekspresijo rekombinantnih proteinov in polipeptidnih zdravil v kvasovkah.
Vodilne mikrofiltracijske membranske kasete sprejmejo kanal odprtega pretoka in način filtracije tangencialnega toka, ki lahko učinkovito obdela kompleksno dovodno tekočino, kot je fermentacijska tekočina kvasovk in tekočina za krekiranje E. coli pri visoki hitrosti, in lahko zagotovi linearno ojačanje od majhnega testnega do proizvodnega obsega. Kompaktna modularna zasnova, preprosta cevovodna povezava, neodvisnost in berljivost sistema lahko zaščitijo operaterje in preprečijo biološko onesnaženje. In brez preverjanja vzdrževanja in čiščenja. Zato je zelo primeren za korak razčiščevanja zgodnje nadaljnje obdelave.
Glavni namen postopka UF/DF je odstranjevanje nečistoč in izpodrivanje pufrov. Guidling ultrafiltracijska membranska kaseta ima dobro homogenost velikosti membranskih por in močno hidrofilnost, kar lahko membrani zagotovi večji pretok in manjšo adsorpcijo beljakovin ter optimizirano zasnovo pretočnega kanala z manjšim padcem tlaka, enostavnim prenosom materiala in znatno skrajšanim časom filtracije. Poleg tega je serija izdelkov popolna in prilagodljiva za izpolnjevanje potreb različnih aplikacij v različnih obsegih. Zato je zelo primeren za korak UF/DF nadaljnje obdelave.
Sledi primer uporabe Guidlingove membranekasetapri izražanju rekombinantnih proteinov v kvasovkah.
Mikrofiltracijsko bistrenje
Uporabili smo {{0}}.11 kvadratnih metrov membranske kasete s porami 0,22 μm za bistrenje 1,5 L fermentacijske tekočine kvasa (ciljna molekulska masa proteina 42-55 KD) z mikrofiltracijo. V celotnem procesu mikrofiltracije so raziskovali stopnjo izkoristka ciljnega proteina, spremembo motnosti in zmanjšanje membranskega pretoka.
0-17min je postopek koncentracije, 17-32min je postopek pranja in filtracije. Med celotnim procesom mikrofiltracije se je TMP postopoma povečeval, vstopna hitrost tekočine je ostala nespremenjena, povprečni pretok materiala pa je bil 45 LMH.
Motnost tekočine je bila 600NTU pred mikrofiltracijo in 8NTU po mikrofiltraciji, motnost pa se je očitno spremenila.
Rezultati so pokazali, da je bil izkoristek ciljnega proteina > 90%. Membranska kaseta Guidling Technology 0,22 μm je stabilna in primerna za ta scenarij uporabe.
Ultrafiltracijska koncentracija
Ultrafiltracijska koncentracija 1,5 L očiščene tekočine (ciljna molekulska masa proteina 42-55kd) je bila izvedena z uporabo 0.11 kvadratnih metrov 10kd membranske kasete. V celotnem procesu ultrafiltracije so raziskovali stopnjo obnovitve ciljnega proteina, izčrpanost membranskega pretoka in stopnjo obnovitve vodnega toka.
Pred in po uporabi lahko stopnja obnovitve membrane doseže 90 %.
0-15min je proces koncentracije, 15-18min je proces izmenjave tekočine. Med celotnim procesom ultrafiltracije se je TMP postopoma povečeval, vstopna hitrost tekočine je ostala nespremenjena, povprečni tok materiala pa je bil 50 LMH.
Rezultati so pokazali, da je bil ciljni protein popolnoma ujet. Membranske kasete Guidling Technology 10kd lahko delujejo stabilno in so primerne za ta scenarij uporabe.
Večina rekombinantnih proteinov, ki jih izražajo kvasovke, ni bila močno izražena. Motnost filtrirane tekočine se je očitno zmanjšala in stopnja predelave beljakovin je bila višja. Ker je kasnejši kromatografski čas predolg, bo povzročil škodljive učinke na beljakovine, da bi skrajšali kromatografski čas vzorčenja, lahko dodamo en korak ultrafiltracijske koncentracije in ciljni protein se lahko koncentrira hitro po vzorcu, kar lahko doseči namen prihranka časa, zmanjšanja prostornine polnila in s tem zmanjšanja proizvodnih stroškov.
Kasete z mikrofiltracijsko membrano Guidling Technology lahko na splošno zmanjšajo motnost dovodne tekočine na manj kot 20 NTU, kar v celoti zadosti potrebam naknadne ultrafiltracije in kromatografije. Ultrafiltracijska stopnja obnovitve kaset z ultrafiltracijsko membrano se bo razlikovala zaradi različnih materialov, splošna stopnja obnovitve lahko doseže 90-95%.
Guidling Technology vas vabi, da zahtevate testne komplete za sorodno oceno.
O Guidlingu
Guidling Technology je nacionalno visokotehnološko podjetje, ki se osredotoča na biofarmacevtiko, celično kulturo, čiščenje in koncentracijo biomedicine, diagnostiko in industrijske tekočine. Uspešno smo razvili centrifugalne filtrirne naprave, ultrafiltracijske in mikrofiltracijske kasete, virusni filter, sistem TFF, globinski filter, votla vlakna itd., ki v celoti izpolnjujejo scenarije uporabe biofarmacevtskih izdelkov, celične kulture itd. Naše membrane in membranski filtri se pogosto uporabljajo pri koncentraciji, ekstrakciji in ločevanju predfiltracije, mikrofiltracije, ultrafiltracije in nanofiltracije. Naše številne linije izdelkov, od majhnih laboratorijskih filtrov za enkratno uporabo do proizvodnih filtracijskih sistemov, testiranja sterilnosti, fermentacije, celične kulture in več, izpolnjujejo potrebe testiranja in proizvodnje. Guidling Technology se veseli sodelovanja z vami!
