Kako izbrati ustrezno ultrafiltracijo Tube
Ultrafiltraciske cevi, ki se pogosto uporabljajo za koncentracijo beljakovin in zamenjavo odbojnika, se pogosto uporabljajo v ultrafiltracijskih ceveh. Obstajajo tudi drugi modeli, ki imajo različne velikosti volumna in ultrafiltracijo cevi, odvisno od molekulske teže ciljne beljakovine, volumna pred koncentracijo in ciljne prostornine koncentracije. Ponovno.
1. Izberite primerno ultrafiltracijo cev, predvsem glede na MWCO in volumen koncentracije. Na splošno, molekularna teža ne sme biti večja od 1 / 3 molekulske mase ciljnih beljakovin. Če je molekulska teža ciljnih beljakovin približno 10 kd, se lahko uporabi ultrafiltracijo cev z obhajano molekulsko maso 3 KD.
2. Na novo kupljena ultrafiltracija je suha. Pred uporabo dodajte miliq vode. Voda gre povsem skozi membrano in je za nekaj minut precooled v ledeno kopel ali hladilnik. Nato izlijte vodo, da dodate beljakovinsko raztopino. Količina beljakovinske raztopine ne sme presegati bele črte na vrhu epruvete. Enostavna operacija. Pred dodajanjem raztopine beljakovin je treba ultrafiltracijo cev vstaviti v led pred hlajenjem.
3. Ravnotežje. Masa in središče težnosti morata biti uravnotežena. Upoštevajte, da hitrost in pospešek ne smeta biti prehitra, sicer bo ultrafiltracijo membrana neposredno poškodovana. Začnite centrifugalno ultrafiltracijo (precooling centrifuge na 4 stopinje). Smer diafragme in vrteče se grede lahko prilagodimo v skladu z navodili (pri kotni centrifuzi je prepona pravokotna na gred). Pri dejanski uporabi je splošna hitrost nižja od hitrosti, določene v priročniku, kar lahko podaljša življenjsko dobo centrifugalne cevi.
4. ko je koncentriran na preostalih 1ml, [vzemite 50ul gospodinjske Bradford raztopine, dodajte 10ul tekočine, da vidite, če postane moder, in ugotoviti, ali ultrafiltracijo cev pušča beljakovine. Če cev pušča, jo vlijte v zgornji sloj in nato odtekajte nazaj v novo cev za začetek ultrafiltracije. Če želite natančno ugotoviti, ali epruveta uhaja, prosimo 5mg 10min centrifuge 10min, nato pa jo podajte skozi, zaženite beljakovinski gel ali Bradford] [nagoglo merjenje]. Še naprej dodajajte preostalo raztopino beljakovin za koncentrat (delujete na ledu, da preprečite segrevanje beljakovin), dokler se ne dodajo vse koncentrirane raztopine. Med centrifugacijo bodite pozorni na to, ali pride do padavin beljakovin in povzroča blokado cevi. Če pride do padavin, prosimo, določite poseben vzrok padavin, ali je koncentracija beljakovin preveč visoka ali pa je blažilnik neprimeren; Prvo lahko rešimo z uporabo več ultrafiltracijskih cevi hkrati za zmanjšanje koncentracije, medtem ko lahko slednji spremeni različne blažilnike, dokler beljakovine ne padavin.
5. Prejšnji koraki se uporabljajo za koncentrat beljakovin. Če je treba zamenjati blažilnik, Pri koncentraciji totalne proteinske raztopine na približno 1ml, nežno dodajte novi pufer (ultrafiltracija preko 0,22um ultrafiltracijske membrane), a nato se kontinuirano koncentrirajte na približno 1ml trikrat, tako da konačna koncentracija zavisi od potrebne koncentracije proteina, a to je običajno ne preko 500ul niti manja od 200ul. Glede na koncentracijo volumna najmanj 10-krat vsakič, je več kot 1000 krat več kot trikrat, kar lahko v bistvu doseže namen spremembe blažilnika.
6. Odstranite koncentrat končnih beljakovin. Operirajte led. Z rumeno pipeto (200ul) nežno vstavite konico pipete ob rob, nato nežno pihnete in zmešate raztopino beljakovin. Pazite, da se ne dotaknete ultrafiltracijske membrane. Sesajte koncentrirano raztopino na 200ul vsakič, dokler ni popolnoma zanič. Na dnu epruvete ni treba izvleči zadnje koncentrirane raztopine, sicer je pretežka in ultrafiltracijo lahko poškodujejo. Na koncu se milliq voda doda v ultrafiltracijo cev brez prehoda skozi ultrafiltracijo membrane, da se prepreči izguba vode in sušenje membrane.
7. Spodaj so koraki za zdravljenje ultrafiltracijo cev in ponovno uporabo ultrafiltracijo cevi.
8. Vodo vlijte v ultrafiltracijo in večkrat nežno sperite z miliq vodo. [če so na dnu epruvete očitne beljakovinske padavine, lahko najprej dodate vodo in jo nato odpihnete s pipeto. Pazite, da se ne dotaknete membrane. Sediment visi dol in potem zbeži. Ne moreš ga posuti z vodo iz pipe. Po dodajanju 0,2m NaOH raztopine jo postavite na sobno temperaturo 20 minut in v tem obdobju uravnotežiti ultrafiltracijo. Centrifuga še 10 minut. Izlijte preostalo raztopino NaOH in vlijte bombažno jedro v posodo (1 ali 2L) Milliq vode, ki jo postavite več ur, nato pa jo zamenjajte z novo vodo, ki jo namestite več ur, da se koncentrira koncentracija NaOH. 50ml epruveto umijte in pokrijte z vodo iz pipe, notranja stena pa umijte z miliq vodo.
9. Vzemite jedro za vmešano epruveto, ga dodajte v polno miliq vodo in nato napolnite 50ml epruveto z miliq vodo. Počasi dajte jedro cevi v 50ml.
Centrifugno cev, odtekajte in razdelite vodo, nato pa pokrijte in shranjujte pri 4 stopinjah do naslednje uporabe. Na splošno se v skladu z zgornjimi koraki in previdnostmi vsaka cev ne bo zlomila v treh ali štirih letih.